銅陵市分子診斷試劑原材料標(biāo)準(zhǔn)
發(fā)布時(shí)間：2023-03-09 01:33:41
銅陵市分子診斷試劑原材料標(biāo)準(zhǔn)
隨著對(duì)動(dòng)物檢疫工作的發(fā)展與完善,僅依靠獸醫(yī)的經(jīng)驗(yàn)檢查已經(jīng)不能滿(mǎn)足現(xiàn)今動(dòng)物疫病診斷的需求,因此,病理化驗(yàn)室開(kāi)始發(fā)揮重要作用.如藍(lán)耳病的病原學(xué)檢測(cè)方式需要采集病豬的扁桃體,淋巴結(jié),肺,肝,脾等,利用10%的中性福爾馬林進(jìn)行固定,經(jīng)過(guò)石蠟切片,HE染色之后使用光鏡對(duì)樣本進(jìn)行病理學(xué)組織檢查得出結(jié)論,又如豬瘟的病理學(xué)檢查方式主要有免疫熒光實(shí)驗(yàn),酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn),核酸探針技術(shù),基因芯片檢測(cè)技術(shù)等.
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熱啟動(dòng)PCR（hot start PCR）是指使Taq DNA 聚合酶只有在樣品溫度至少超過(guò)70℃時(shí)才發(fā)揮作用的PCR，可提高反應(yīng)的特異性。Taq DNA 聚合酶通常在比適宜溫度低得多的條件下仍有較強(qiáng)的活性。PCR 反應(yīng)的初加熱過(guò)程中，樣品溫度上升到70℃之前，在較低的溫度下引物可能與部分單鏈模板形成非特異性結(jié)合，并在Taq DNA 聚合酶的作用下延伸。結(jié)果會(huì)導(dǎo)致非靶序列的擴(kuò)增，影響反應(yīng)的特異性。熱啟動(dòng)可減少非靶序列的擴(kuò)增，提高反應(yīng)的特異性。在引物設(shè)計(jì)時(shí)如果某位點(diǎn)因?yàn)檫z傳元件的定位而受限，如site-directed 突變、表達(dá)克隆或用于DNA 工程的遺傳元件的構(gòu)建和操作等情況，熱啟動(dòng)PCR 尤為有效。
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分子診斷中游主要是分子診斷試劑和儀器兩類(lèi)產(chǎn)品的研發(fā)、生產(chǎn)和銷(xiāo)售，國(guó)內(nèi)試劑發(fā)展較為迅速，而國(guó)產(chǎn)儀器占比相對(duì)較小。 分子診斷試劑盒包括核酸提取試劑盒和核酸檢測(cè)試劑盒，基本已經(jīng)國(guó)產(chǎn)化。HBV（乙肝病毒）、HCV（丙肝病毒）、HIV（艾滋病毒）等常見(jiàn)病毒的核酸檢測(cè)試劑國(guó)內(nèi)生產(chǎn)廠(chǎng)家數(shù)均遠(yuǎn)大于國(guó)外廠(chǎng)家。甲型、乙型、丙型流感等常見(jiàn)疾病的核酸檢測(cè)試劑盒已經(jīng)比較成熟，競(jìng)爭(zhēng)廠(chǎng)家較多，幾乎全部為國(guó)產(chǎn)品牌。
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在動(dòng)物疫病診斷標(biāo)準(zhǔn)等技術(shù)規(guī)范中，酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)對(duì)試驗(yàn)中加底物的反應(yīng)步驟進(jìn)行規(guī)定，規(guī)定固定的時(shí)間，然后加終止液。但是，在許多酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)中，加底物的反應(yīng)步驟需要根據(jù)陰性、陽(yáng)性對(duì)照反應(yīng)情況對(duì)反應(yīng)的時(shí)間進(jìn)行調(diào)整。如當(dāng)陰性與陽(yáng)性對(duì)照的反應(yīng)結(jié)果出現(xiàn)后，實(shí)驗(yàn)人員則可以加終止液。有關(guān)資料規(guī)定的時(shí)間可能太長(zhǎng)或者太短，這樣會(huì)對(duì)反應(yīng)的結(jié)果產(chǎn)生影響。如果加底物的反應(yīng)時(shí)間較長(zhǎng)，樣品則有可能呈現(xiàn)陽(yáng)性，易導(dǎo)致誤診情況的產(chǎn)生。
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高致病性禽流感：對(duì)全國(guó)所有雞、鴨、鵝、鵪鶉等人工飼養(yǎng)的禽類(lèi)，根據(jù)當(dāng)?shù)貙?shí)際情況，在科學(xué)評(píng)估的基礎(chǔ)上選擇適宜疫苗，進(jìn)行H5亞型和（或）H7亞型高致病性禽流感免疫。對(duì)供研究和疫苗生產(chǎn)用的家禽、進(jìn)口國(guó)（地區(qū)）明確要求不得實(shí)施高致病性禽流感免疫的出口家禽，以及因其他特殊原因不免疫的，有關(guān)養(yǎng)殖場(chǎng)（戶(hù)）逐級(jí)報(bào)省級(jí)農(nóng)業(yè)農(nóng)村部門(mén)同意后，可不實(shí)施免疫。
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熱啟動(dòng)Taq酶的產(chǎn)生：在PCR的反應(yīng)過(guò)程中，主要有三個(gè)階段：變性、復(fù)性、延伸。Taq DNA聚合酶的復(fù)性溫度是72℃，但其在低溫下也有活性（活性較弱），也能催化引物與模板復(fù)性，只是錯(cuò)配率高，發(fā)生非特異性復(fù)性機(jī)率大。這樣在未達(dá)到72℃之前，反應(yīng)在Taq酶聚合下不斷擴(kuò)增出非特異性產(chǎn)物，而使實(shí)驗(yàn)失敗。在傳統(tǒng)的PCR反應(yīng)中，這樣由低溫上升至高溫的過(guò)程中，引物錯(cuò)配和二聚體的形成機(jī)率非常高，Hot Start Taq DNA聚合酶就是讓PCR反應(yīng)一開(kāi)始就在大于70℃下進(jìn)行。當(dāng)溫度較低時(shí)，酶活性被封閉，當(dāng)溫度大于一定溫度時(shí)酶又開(kāi)始工作。這樣就避免了在低溫下復(fù)性、延伸的過(guò)程，消除引物錯(cuò)配和二聚體形成，減少非特異性產(chǎn)物的產(chǎn)生。我們是如何對(duì)Hotstart Taq酶修飾而讓它只在高溫下才能發(fā)揮活性？這就是Hot Start taq酶的作用原理。