營口市分子診斷試劑原材料服務(wù)
發(fā)布時間：2024-11-12 01:06:03
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常用的動物檢疫方法:常用的動物檢疫方法有臨床檢查、實驗室檢驗等方法。臨床檢查方法主要看動物的表現(xiàn)(靜、動、臥、起、立、精神、食欲等)是否正常，體溫、脈搏、呼吸等是否在正常生理指標范圍內(nèi)。實驗室檢驗則依照農(nóng)業(yè)部頒布的動物檢疫操作規(guī)程規(guī)定的檢疫方法和判定標準執(zhí)行。①產(chǎn)地檢疫。是指動物離開飼養(yǎng)產(chǎn)地之前的檢疫。②屠宰檢疫。是指在宰前、宰后及屠宰過程中，對動物及動物產(chǎn)品所實施的檢疫。包括宰前檢疫②屠宰檢疫。是指在宰前、宰后及屠宰過程中，對動物及動物產(chǎn)品所實施的檢疫。包括宰前檢疫和宰后檢疫兩個環(huán)節(jié)。③檢疫證明。是指檢疫機關(guān)給檢疫合格的動物、動物產(chǎn)品出具的法律書證。現(xiàn)行農(nóng)業(yè)部統(tǒng)一監(jiān)制、發(fā)放和使用的檢疫證明包括《動物檢疫合格證明》、《動物產(chǎn)品檢疫合格證明》、《出縣境動物檢疫合格證明》、《出縣境動物產(chǎn)品檢疫合格證明》和《動物及動物產(chǎn)品運載工具消毒證明》5種。
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Taq DNA聚合酶具有很高的加工合成特性，在適反應(yīng)溫度時，dNTP的摻入速度為35～100 nt/（s．酶分子），擴增長度可達7.6 kb。在低溫條件下，Taq DNA聚合酶的活性明顯降低，導(dǎo)致此酶在模板內(nèi)局部二級結(jié)構(gòu)區(qū)域的延伸能力受阻或前進速率常數(shù)與解離常數(shù)的比值發(fā)生改變。在較高的溫度（95℃以上）時，很少有DNA合成；在體外，DNA在較高溫度時的合成速度受到引物或引物鏈與模板鏈雙鏈結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性的限制。由于Taq DNA聚合酶的適反應(yīng)溫度高達75～80℃，故退火溫度和延伸溫度均可適當提高，這限制了非特異性擴增產(chǎn)物的出現(xiàn)，增加了PCR反應(yīng)的特異性。
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常規(guī)普通PCR常見問題：1. 優(yōu)化反應(yīng)條件，梯度摸索退火溫度，延長退火延伸時間，增加反應(yīng)循環(huán)數(shù)（30-45區(qū)間為宜）。2. 對核酸模板進行純化，或使用商業(yè)化核酸提取試劑盒進行提取，增加核酸模板的上樣量。3. 優(yōu)化反應(yīng)體系（預(yù)混體系除外），改變檢測體系中的Mg2+濃度及dNTPs用量，更換體系中Buffer。4. 重新設(shè)計引物，避免引物二聚體和鏈內(nèi)二級結(jié)構(gòu)，在一次稀釋引物后可分裝成多支小管，減少反復(fù)凍融次數(shù)。
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化驗室診斷方法- -般采用的檢測依據(jù)為國家標準、農(nóng)業(yè)標準，其次是有關(guān)動物疫病檢測的其它技術(shù)規(guī)程、規(guī)范等，還可以采用化驗室自行設(shè)定的檢測方法。應(yīng)結(jié)合化驗室條件及樣品類型等因素來選擇合適的方法。例如，化驗室需診斷偽狂犬病，如果沒有基因擴增儀，但有酶標儀，就可以采用酶聯(lián)免疫吸附試驗診斷，而不必用聚合酶鏈反應(yīng)試驗診斷。使用化驗室自行設(shè)定的檢驗方法要慎重,因為，一該檢驗方法是否正確有待驗證;二如果將來有爭議.上訴法院，會有較大的麻煩。