牡丹江市熱啟動Taq酶應用領域
發(fā)布時間：2024-09-22 01:09:30
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Taq酶的酶動力與擴增效率有關。一般熱啟動Taq酶的酶動力越強，PCR擴增的指數增長期越長，‘S型’曲線更加典型，熒光信號值更高，而且更適合做多重PCR檢測。我們曾比較過多家公司的熱啟動Taq酶，在國外品牌中，英國Bioline公司的熱啟動Taq酶，酶動力較好，可做4重PCR，等量起始模板CT30時的熒光信號值高。在國內品牌中，BIOG熱啟動Taq酶的指數期較長，可做3重PCR，且擴增曲線的‘S’型不受影響，其它的國產品牌一般只能支持2重反應，在做3重反應時，擴增曲線低矮，熒光信號值較低，無典型擴增曲線，結果很難判定。
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分子診斷是當代醫(yī)學發(fā)展的重要前沿領域之一，其核心技術是基因診斷，常規(guī)技術包括：（1）聚合酶鏈式反應（PCR）；（2）DNA測序（DNA sequencing）；（3）熒光原位雜交技術（FISH）；（4）DNA印跡技術（ DNA blotting ）；（5）單核苷酸多態(tài)性（SNP）；（6）連接酶鏈反應（LCR）；（7）基因芯片技術（gene chip）。
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隨著對動物檢疫工作的發(fā)展與完善,僅依靠獸醫(yī)的經驗檢查已經不能滿足現(xiàn)今動物疫病診斷的需求,因此,病理化驗室開始發(fā)揮重要作用.如藍耳病的病原學檢測方式需要采集病豬的扁桃體,淋巴結,肺,肝,脾等,利用10%的中性福爾馬林進行固定,經過石蠟切片,HE染色之后使用光鏡對樣本進行病理學組織檢查得出結論,又如豬瘟的病理學檢查方式主要有免疫熒光實驗,酶聯(lián)免疫吸附實驗,核酸探針技術,基因芯片檢測技術等.
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動物疫病包括動物傳染病、寄生蟲病。動物傳染病，即由病原體侵入動物體內，使動物產生具有一定潛伏期和臨床癥狀并具有傳播性 的動物疫病，如口蹄疫、雞瘟、牛肺疫、炭疽、布魯氏菌病、狂 犬病等。動物寄生蟲病，即由寄生蟲寄生在動物體內或體表引起 的疾病，如豬囊蟲病、旋毛蟲病、鉤端螺旋體病、血吸蟲病、疥瞞等。根據動物疫病對養(yǎng)殖業(yè)生產和人體健康的危害程度，我國還 將動物疫病分為下列三類：對人畜危害嚴重、需要采取緊急、嚴 厲的強制預防、控制、撲滅措施的為一類疫??；可造成重大經濟 損失、需要采取嚴格控制、撲滅措施，防止疫情擴散的為二類疫 ??；常見多發(fā)、可能造成重大經濟損失、需要控制和凈化的為三 類疫病。
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由于應用領域廣泛，分子診斷行業(yè)在全球得到了飛速發(fā)展。隨著靶向治療逐漸成為腫瘤準確治療的重要方法，釋放更多腫瘤個性化用藥檢測（伴隨檢測）需求。新靶向藥不斷推出和個性化用藥檢測滲透率提升，推動了個性化用藥檢測行業(yè)的快速發(fā)展?；驕y序已在無創(chuàng)產前檢測（NIPT）大規(guī)模應用，并基于全 面二孩政策推動需求快速增長。未來隨著技術進步和成本下降，基因測序在腫瘤早篩和個人基因組檢測領域中應用前景更廣。
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熱啟動PCR（hot start PCR）是指使Taq DNA 聚合酶只有在樣品溫度至少超過70℃時才發(fā)揮作用的PCR，可提高反應的特異性。Taq DNA 聚合酶通常在比適宜溫度低得多的條件下仍有較強的活性。PCR 反應的初加熱過程中，樣品溫度上升到70℃之前，在較低的溫度下引物可能與部分單鏈模板形成非特異性結合，并在Taq DNA 聚合酶的作用下延伸。結果會導致非靶序列的擴增，影響反應的特異性。熱啟動可減少非靶序列的擴增，提高反應的特異性。在引物設計時如果某位點因為遺傳元件的定位而受限，如site-directed 突變、表達克隆或用于DNA 工程的遺傳元件的構建和操作等情況，熱啟動PCR 尤為有效。