無錫市分子診斷試劑原材料研發(fā)
發(fā)布時間:2024-05-27 01:14:32
無錫市分子診斷試劑原材料研發(fā)
指導思想。按照保供固安 全、振興暢循環(huán)的工作定位,立足維護養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展安 全、公共衛(wèi)生安 全和生物安 全大局,堅持防疫優(yōu)先,扎實開展動物疫病強制免疫,切實筑牢動物防疫屏障?;驹瓌t。堅持人病獸防、關口前移,預防為主、應免盡免,落實完善免疫效果評價制度,強化疫苗質(zhì)量管理和使用效果跟蹤監(jiān)測,保證“真苗、真打、真有效".目標要求。強制免疫動物疫病的群體免疫密度應常年保持在百分之90以上,應免畜禽免疫密度應達到百分之100,高致病性禽流感、口蹄疫和小反芻獸疫免疫抗體合格率常年保持在百分之70以上。

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在動物疫病診斷標準等技術規(guī)范中,酶聯(lián)免疫吸附試驗對試驗中加底物的反應步驟進行規(guī)定,規(guī)定固定的時間,然后加終止液。但是,在許多酶聯(lián)免疫吸附試驗中,加底物的反應步驟需要根據(jù)陰性、陽性對照反應情況對反應的時間進行調(diào)整。如當陰性與陽性對照的反應結(jié)果出現(xiàn)后,實驗人員則可以加終止液。有關資料規(guī)定的時間可能太長或者太短,這樣會對反應的結(jié)果產(chǎn)生影響。如果加底物的反應時間較長,樣品則有可能呈現(xiàn)陽性,易導致誤診情況的產(chǎn)生。

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Taq DNA聚合酶具有很高的加工合成特性,在適反應溫度時,dNTP的摻入速度為35~100 nt/(s.酶分子),擴增長度可達7.6 kb。在低溫條件下,Taq DNA聚合酶的活性明顯降低,導致此酶在模板內(nèi)局部二級結(jié)構區(qū)域的延伸能力受阻或前進速率常數(shù)與解離常數(shù)的比值發(fā)生改變。在較高的溫度(95℃以上)時,很少有DNA合成;在體外,DNA在較高溫度時的合成速度受到引物或引物鏈與模板鏈雙鏈結(jié)構穩(wěn)定性的限制。由于Taq DNA聚合酶的適反應溫度高達75~80℃,故退火溫度和延伸溫度均可適當提高,這限制了非特異性擴增產(chǎn)物的出現(xiàn),增加了PCR反應的特異性。

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分子診斷是當代醫(yī)學發(fā)展的重要前沿領域之一,其核心技術是基因診斷,常規(guī)技術包括:(1)聚合酶鏈式反應(PCR);(2)DNA測序(DNA sequencing);(3)熒光原位雜交技術(FISH);(4)DNA印跡技術( DNA blotting );(5)單核苷酸多態(tài)性(SNP);(6)連接酶鏈反應(LCR);(7)基因芯片技術(gene chip)。

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熱啟動酶是耐高溫的依賴于DNA模板的DNA聚合酶,來源于嗜熱的嗜熱水生菌Thermus aquaticus YT一1,一般應用于PCR反應。TaqDNA聚合酶是一種M92+依賴酶,反應體系中須有Mg2+存在,然而保持適當?shù)腗g2+濃度十分重要,因為Mg2+濃度過高或過低均會影響引物與模板的結(jié)合、模板與PCR產(chǎn)物的解鏈溫度、引物二聚體的形成以及酶的活性與精 確性。