通遼市實時熒光定量PCR儀研發(fā)
發(fā)布時間：2024-03-31 01:14:47
通遼市實時熒光定量PCR儀研發(fā)
人們生活水平不斷提升,對食品質量安 全提出更高的要求,檢疫工作不斷深入與完善,僅依靠感觀檢查已遠不能滿足當今工作的需要,須使病理化驗室發(fā)揮的作用.為更好地配合產(chǎn)地檢疫,屠宰檢疫及農貿市場的肉食品檢疫,根據(jù)《動物防疫法》,《食品衛(wèi)生法》,《定點屠宰管理辦法》及相關法律法規(guī)的精神,結合實際工作需要,高度重視動物的防疫工作.而動物疫病的診斷離不開先進的技術和設備,該文主要圍繞動物疫病診斷化驗室操作中常見的問題進行分析.
通遼市實時熒光定量PCR儀研發(fā)
熱啟動Taq酶的產(chǎn)生：在PCR的反應過程中，主要有三個階段：變性、復性、延伸。Taq DNA聚合酶的復性溫度是72℃，但其在低溫下也有活性（活性較弱），也能催化引物與模板復性，只是錯配率高，發(fā)生非特異性復性機率大。這樣在未達到72℃之前，反應在Taq酶聚合下不斷擴增出非特異性產(chǎn)物，而使實驗失敗。在傳統(tǒng)的PCR反應中，這樣由低溫上升至高溫的過程中，引物錯配和二聚體的形成機率非常高，Hot Start Taq DNA聚合酶就是讓PCR反應一開始就在大于70℃下進行。當溫度較低時，酶活性被封閉，當溫度大于一定溫度時酶又開始工作。這樣就避免了在低溫下復性、延伸的過程，消除引物錯配和二聚體形成，減少非特異性產(chǎn)物的產(chǎn)生。我們是如何對Hotstart Taq酶修飾而讓它只在高溫下才能發(fā)揮活性？這就是Hot Start taq酶的作用原理。
通遼市實時熒光定量PCR儀研發(fā)
全球，雖然只有少數(shù)的芯片可用于臨床診斷，但國內基因芯片技術已經(jīng)處于世界領 跑的地位?；蛐酒夹g將是熒光定量PCR 檢測技術具挑戰(zhàn)的潛在對手，主要是：熒光定量PCR 技術一次只能檢測一個或幾個目標基因，而基因芯片技術可以實現(xiàn)對大量目標基因的同時檢測。隨著人類基因組計劃的進展，基因芯片在國內外已成為研發(fā)熱點。若基因芯片技術迅速成熟并大規(guī)模產(chǎn)業(yè)化，將對熒光定量PCR 檢測產(chǎn)生較大的沖擊。不過，基因芯片的大規(guī)模臨床應用還存在尚未克服的技術缺陷，主要是由于芯片診斷特異性和靈敏度低、芯片診斷成本高昂和芯片診斷配套儀器價格昂貴等原因，預計熒光定量PCR 檢測技術在今后5 到10 年內可保持前鋒。
通遼市實時熒光定量PCR儀研發(fā)
Taq酶的酶動力與擴增效率有關。一般熱啟動Taq酶的酶動力越強，PCR擴增的指數(shù)增長期越長，‘S型’曲線更加典型，熒光信號值更高，而且更適合做多重PCR檢測。我們曾比較過多家公司的熱啟動Taq酶，在國外品牌中，英國Bioline公司的熱啟動Taq酶，酶動力較好，可做4重PCR，等量起始模板CT30時的熒光信號值高。在國內品牌中，BIOG熱啟動Taq酶的指數(shù)期較長，可做3重PCR，且擴增曲線的‘S’型不受影響，其它的國產(chǎn)品牌一般只能支持2重反應，在做3重反應時，擴增曲線低矮，熒光信號值較低，無典型擴增曲線，結果很難判定。